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一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法pdf
518033 广东省深圳市福田区金田路3038号现代商务大厦23层2302X1
本发明公开了一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，包括以下步骤，向酶解处理后的脑干细胞组织液加入人体的生理盐水，放入差速离心机中进一步过滤，得到高纯度脑干细胞组织液，将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础培养基中充分溶解，对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组，并且分别加入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清基础培养基中，培养环境接近于人体生存环境，本发明涉及干细胞技术领域。该人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，达到了实现多组用免疫荧光物质染色，便于研究追踪脑干细胞的分化和传代率，保证实验数据真实和准确性，实现吸取培养液的同时定量量取培养液，提高吸取效率，同时缩短吸取过程消耗的时间，保证脑干细胞活性的目的。
1.一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、对人体的脑干组织切片，用生理盐水清洗切片的脑干组织，用酒精棉将表面擦拭干净；步骤二、切片的脑干组织放入30%的蔗糖溶液中4℃保存，脑干组织在蔗糖溶液中脱水；步骤三、对脱水的切片脑干粉碎处理，使用浓度为0.1%的胶原酶Ⅰ处理，控制胶原酶Ⅰ的温度在人体生存的最适温度36℃-37℃，酶解处理时间为6～8小时；步骤四、向酶解处理后的脑干细胞组织液加入五倍体积的人体的生理盐水，经过筛网初步过滤后，放入差速离心机中进一步过滤，得到高纯度脑干细胞组织液；步骤五、制备八组无血清基础培养基中，将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础培养基中充分溶解，通过专用吸取装置（1）对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组，并且分别加入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清基础培养基中，培养环境接近于人体生存环境；步骤六、分别提取八组无血清基础培养基中的脑干细胞组织，在显微镜下观察各组BrdU和DCX荧光物质在脑干细胞组织中的位置，根据观察结果研究脑干细胞的分化和传代；步骤七、对标记后的脑干细胞组织进行冷冻封存处理。 2.根据权利要求1所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述步骤七中冷冻封存处理，按照一定的时间和降速度进行冷冻，然后转移到液氮罐中封存。 3.根据权利要求1所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述步骤五中脑干细胞在无血清基础培养基内的培养时间为7～8天。 4.根据权利要求1所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述专用吸取装置（1）包括移液收集槽（2），所述移液收集槽（2）顶端固定连接有固定顶框（3），所述移液收集槽（2）外壁的表面设置有刻度（4），所述移液收集槽（2）的底端固定连接有连接口（5），所述连接口（5）远离移液收集槽（2）的底端连通有乳胶管（6），所述乳胶管（6）远离连接口（5）的一端连通有采集针头（7）。 5.根据权利要求4所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述固定顶框（3）顶端的中间位置固定连接有贯穿插槽（8），所述贯穿插槽（8）的内部惯出且滑动连接有传动连杆（9）。 6.根据权利要求5所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述传动连杆（9）位于固定顶框（3）外部的顶端固连接有按压触头（10）。 7.根据权利要求5所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述传动连杆（9）位于固定顶框（3）内部的两侧均固定连接有弹簧挡板（11）。 8.根据权利要求7所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述弹簧挡板（11）的顶端通过拉伸弹簧（12）与固定顶框（3）内部顶端固定连接。 9.根据权利要求7所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述传动连杆（9）底端延伸至专用吸取装置（1）内部的一端固定连接有橡胶移液塞（13）。 10.根据权利要求4所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述刻度（4）的量程设置为20-200mL。
本发明涉及干细胞技术领域，具体为一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法。
干细胞即为起源细胞。干细胞是具有增殖和分化潜能的细胞，具有自我更新复制的能力，能够产生高度分化的功能细胞。它是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。干细胞在形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。干细胞是自我复制还是分化功能细胞，主要由于细胞本身的状态和微环境因素所决定。包括调节细胞周期的各种周期素和周期素依赖激酶、基因转录因子、影响细胞不对称分裂的细胞质因子。微环境因素，包括干细胞与周围细胞，干细胞与外基质以及干细胞与各种可溶性因子的相互作用。
目前在人体的脑干细胞研究中，需要研究人体脑干细胞分化能力和传代能力，实验中跟踪人体脑干细胞分化和传代的能力差，从延长了研究的时间，在此过程中提高了人体脑干细胞的失活率，不能保证研究实验数据的真实准确性。
针对现有技术的不足，本发明提供了一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，解决了目前在人体的脑干细胞研究中，需要研究人体脑干细胞分化能力和传代能力，实验中跟踪人体脑干细胞分化和传代的能力差，从延长了研究的时间，在此过程中提高了人体脑干细胞的失活率，不能保证研究实验数据的真实准确性的问题。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、对人体的脑干组织切片，用生理盐水清洗切片的脑干组织，用酒精棉将表面擦拭干净；
步骤二、切片的脑干组织放入 30% 的蔗糖溶液中 4℃保存，脑干组织在蔗糖溶液中脱水；
步骤三、对脱水的切片脑干粉碎处理，使用浓度为0.1%的胶原酶Ⅰ处理，控制胶原酶Ⅰ的温度在人体生存的最适温度36℃-37℃，酶解处理时间为6～8小时；
步骤四、向酶解处理后的脑干细胞组织液加入五倍体积的人体的生理盐水，经过筛网初步过滤后，放入差速离心机中进一步过滤，得到高纯度脑干细胞组织液；
步骤五、制备八组无血清基础培养基中，将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础培养基中充分溶解，通过专用吸取装置1对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组，并且分别加入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清基础培养基中，培养环境接近于人体生存环境；
步骤六、分别提取八组无血清基础培养基中的脑干细胞组织，在显微镜下观察各组BrdU和DCX荧光物质在脑干细胞组织中的位置，根据观察结果研究脑干细胞的分化和传代；
优选的，所述步骤七中冷冻封存处理，按照一定的时间和降速度进行冷冻，然后转移到液氮罐中封存。
优选的，所述专用吸取装置包括移液收集槽，所述移液收集槽顶端固定连接有固定顶框，所述移液收集槽外壁的表面设置有刻度，所述移液收集槽的底端固定连接有连接口，所述连接口远离移液收集槽的底端连通有乳胶管，所述乳胶管远离连接口的一端连通有采集针头。
优选的，所述固定顶框顶端的中间位置固定连接有贯穿插槽，所述贯穿插槽的内部惯出且滑动连接有传动连杆。
优选的，所述传动连杆底端延伸至专用吸取装置内部的一端固定连接有橡胶移液塞。
（1）、该人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，通过切片的脑干组织放入 30% 的蔗糖溶液中 4℃保存，脑干组织在蔗糖溶液中脱水，对脱水的切片脑干粉碎处理，使用浓度为0.1%的胶原酶Ⅰ处理，控制胶原酶Ⅰ的温度在人体生存的最适温度37℃，酶解处理时间为8小时，向酶解处理后的脑干细胞组织液加入五倍体积的人体的生理盐水，经过筛网初步过滤后，放入差速离心机中进一步过滤，得到高纯度脑干细胞组织液，制备八组无血清基础培养基中，将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础培养基中充分溶解，通过专用吸取装置1对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组，并且分别加入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清基础培养基中，培养环境接近于人体生存环境，达到了实现多组用免疫荧光物质染色，便于研究追踪脑干细胞的分化和传代率，保证实验数据真实和准确性的目的。
（2）、该人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，通过手动向下按压按压触头,按压触头带动传动连杆向下移动，传动连杆带动拉伸弹簧在移液收集槽内向下移动，将采集针头放入培养液中，手缓缓松开按压触头,拉伸弹簧通过弹簧挡板带动橡胶移液塞向上移动，根据刻度吸取适量的培养液，达到了实现吸取培养液的同时定量量取培养液，提高吸取效率，同时缩短吸取过程消耗的时间，保证脑干细胞活性的目的。
图中：1专用吸取装置、2移液收集槽、3固定顶框、4刻度、5连接口、6乳胶管、7采集针头、8贯穿插槽、9传动连杆、10按压触头、11弹簧挡板、12拉伸弹簧、13橡胶移液塞。
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-2，本发明提供一种技术方案：一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、对人体的脑干组织切片，用生理盐水清洗切片的脑干组织，用酒精棉将表面擦拭干净；
步骤二、切片的脑干组织放入 30% 的蔗糖溶液中 4℃保存，脑干组织在蔗糖溶液中脱水；
步骤三、对脱水的切片脑干粉碎处理，使用浓度为0.1%的胶原酶Ⅰ处理，控制胶原酶Ⅰ的温度在人体生存的最适温度36℃-37℃，酶解处理时间为6～8小时；
步骤四、向酶解处理后的脑干细胞组织液加入五倍体积的人体的生理盐水，经过筛网初步过滤后，放入差速离心机中进一步过滤，得到高纯度脑干细胞组织液；
步骤五、制备八组无血清基础培养基中，将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础培养基中充分溶解，通过专用吸取装置（1）对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组，并且分别加入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清基础培养基中，培养环境接近于人体生存环境；
步骤六、分别提取八组无血清基础培养基中的脑干细胞组织，在显微镜下观察各组BrdU和DCX荧光物质在脑干细胞组织中的位置，根据观察结果研究脑干细胞的分化和传代；
步骤七中冷冻封存处理，按照一定的时间和降速度进行冷冻，然后转移到液氮罐中封存。步骤五中脑干细胞在无血清基础培养基内的培养时间为7～8天。专用吸取装置1包括移液收集槽2，移液收集槽2顶端固定连接有固定顶框3，移液收集槽2外壁的表面设置有刻度4，移液收集槽2的底端固定连接有连接口5，连接口5远离移液收集槽2的底端连通有乳胶管6，乳胶管6远离连接口5的一端连通有采集针头7。固定顶框3顶端的中间位置固定连接有贯穿插槽8，贯穿插槽8的内部惯出且滑动连接有传动连杆9。传动连杆9位于固定顶框3外部的顶端固连接有按压触头10。传动连杆9位于固定顶框3内部的两侧均固定连接有弹簧挡板11。弹簧挡板11的顶端通过拉伸弹簧12与固定顶框3内部顶端固定连接。传动连杆9底端延伸至专用吸取装置1内部的一端固定连接有橡胶移液塞13。刻度4的量程设置为20-200mL。
使用时，通过切片的脑干组织放入 30% 的蔗糖溶液中 4℃保存，脑干组织在蔗糖溶液中脱水，对脱水的切片脑干粉碎处理，使用浓度为0.1%的胶原酶Ⅰ处理，控制胶原酶Ⅰ的温度在人体生存的最适温度37℃，酶解处理时间为8小时，向酶解处理后的脑干细胞组织液加入五倍体积的人体的生理盐水，经过筛网初步过滤后，放入差速离心机中进一步过滤，得到高纯度脑干细胞组织液，制备八组无血清基础培养基中，将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础培养基中充分溶解，通过专用吸取装置1对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组，并且分别加入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清基础培养基中，培养环境接近于人体生存环境，达到了实现多组用免疫荧光物质染色，便于研究追踪脑干细胞的分化和传代率，保证实验数据真实和准确性的目的。通过手动向下按压按压触头,按压触头带动传动连杆向下移动，传动连杆带动拉伸弹簧在移液收集槽内向下移动，将采集针头放入培养液中，手缓缓松开按压触头,拉伸弹簧通过弹簧挡板带动橡胶移液塞向上移动，根据刻度吸取适量的培养液，达到了实现吸取培养液的同时定量量取培养液，提高吸取效率，同时缩短吸取过程消耗的时间，保证脑干细胞活性的目的。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下。由语句“包括一个......限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素”。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 5.7 (22)申请日 2018.06.22 (71)申请人 安徽 地址 518033 广东省深圳市福田区金田路 3038号现代商务大厦23层2302X1 (72)发明人 安徽 (74)专利代理机构 深圳市神州联合知识产权代 理事务所(普通合伙) 44324 代理人 邓扬 (51)Int.Cl. C12N 5/0797(2010.01) (54)发明名称 一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方 法 (57)摘要 本发明公开了一种人体研究用脑干细胞的 制备和提取。
2、方法， 包括以下步骤， 向酶解处理后 的脑干细胞组织液加入人体的生理盐水， 放入差 速离心机中进一步过滤， 得到高纯度脑干细胞组 织液， 将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础 培养基中充分溶解， 对高纯度脑干细胞组织液等 量分成八组， 并且分别加入到含有BrdU和DCX荧 光物质的无血清基础培养基中， 培养环境接近于 人体生存环境， 本发明涉及干细胞技术领域。 该 人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 达到了 实现多组用免疫荧光物质染色， 便于研究追踪脑 干细胞的分化和传代率， 保证实验数据真实和准 确性， 实现吸取培养液的同时定量量取培养液， 提高吸取效率， 同时缩短吸取过程消耗的时间。
3、， 保证脑干细胞活性的目的。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 108823163 A 2018.11.16 CN 108823163 A 1.一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 步骤一、 对人体的脑干组织切片， 用生理盐水清洗切片的脑干组织， 用酒精棉将表面擦 拭干净； 步骤二、 切片的脑干组织放入 30% 的蔗糖溶液中 4保存， 脑干组织在蔗糖溶液中脱 水； 步骤三、 对脱水的切片脑干粉碎处理， 使用浓度为0.1%的胶原酶 处理， 控制胶原酶 的 温度在人体生存的最适温度36-37， 酶解处理时间为68小时； 步骤四、 向酶解处理后的脑干细胞组。
4、织液加入五倍体积的人体的生理盐水， 经过筛网 初步过滤后， 放入差速离心机中进一步过滤， 得到高纯度脑干细胞组织液； 步骤五、 制备八组无血清基础培养基中， 将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础培养 基中充分溶解， 通过专用吸取装置 （1） 对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法pdf， 并且分别加 入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清基础培养基中， 培养环境接近于人体生存环境； 步骤六、 分别提取八组无血清基础培养基中的脑干细胞组织， 在显微镜下观察各组 BrdU和DCX荧光物质在脑干细胞组织中的位置， 根据观察结果研究脑干细胞的分化和传代； 步骤七、 对标记后的脑干细胞组织进行冷冻封存处理。
5、。 2.根据权利要求1所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 其特征在于： 所 述步骤七中冷冻封存处理， 按照一定的时间和降速度进行冷冻， 然后转移到液氮罐中封存。 3.根据权利要求1所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 其特征在于： 所 述步骤五中脑干细胞在无血清基础培养基内的培养时间为78天。 4.根据权利要求1所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 其特征在于： 所 述专用吸取装置 （1） 包括移液收集槽 （2） ， 所述移液收集槽 （2） 顶端固定连接有固定顶框 （3） ， 所述移液收集槽 （2） 外壁的表面设置有刻度 （4） ， 所述移液收集槽 （2） 的底。
6、端固定连接 有连接口 （5） ， 所述连接口 （5） 远离移液收集槽 （2） 的底端连通有乳胶管 （6） ， 所述乳胶管 （6） 远离连接口 （5） 的一端连通有采集针头 （7） 。 5.根据权利要求4所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 其特征在于： 所 述固定顶框 （3） 顶端的中间位置固定连接有贯穿插槽 （8） ， 所述贯穿插槽 （8） 的内部惯出且 滑动连接有传动连杆 （9） 。 6.根据权利要求5所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 其特征在于： 所 述传动连杆 （9） 位于固定顶框 （3） 外部的顶端固连接有按压触头 （10） 。 7.根据权利要求5所述的一种人。
7、体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 其特征在于： 所 述传动连杆 （9） 位于固定顶框 （3） 内部的两侧均固定连接有弹簧挡板 （11） 。 8.根据权利要求7所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 其特征在于： 所 述弹簧挡板 （11） 的顶端通过拉伸弹簧 （12） 与固定顶框 （3） 内部顶端固定连接。 9.根据权利要求7所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 其特征在于： 所 述传动连杆 （9） 底端延伸至专用吸取装置 （1） 内部的一端固定连接有橡胶移液塞 （13） 。 10.根据权利要求4所述的一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 其特征在于： 所述刻度 （4） 。
8、的量程设置为20-200mL。 权利要求书 1/1 页 2 CN 108823163 A 2 一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法 技术领域 0001 本发明涉及干细胞技术领域， 具体为一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方 法。 背景技术 0002 干细胞即为起源细胞。 干细胞是具有增殖和分化潜能的细胞， 具有自我更新复制 的能力， 能够产生高度分化的功能细胞。 它是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原 始的未分化细胞， 是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。 干细胞在形态上具有共性， 通常呈圆形或椭圆形， 细胞体积小， 核相对较大， 细胞核多为常染色质， 并具有较高的端粒 酶活性。 干。
9、细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。 干细胞是自我复制还是分化功能细胞， 主 要由于细胞本身的状态和微环境因素所决定。 包括调节细胞周期的各种周期素和周期素依 赖激酶、 基因转录因子、 影响细胞不对称分裂的细胞质因子。 微环境因素， 包括干细胞与周 围细胞， 干细胞与外基质以及干细胞与各种可溶性因子的相互作用。 0003 目前在人体的脑干细胞研究中， 需要研究人体脑干细胞分化能力和传代能力， 实 验中跟踪人体脑干细胞分化和传代的能力差， 从延长了研究的时间， 在此过程中提高了人 体脑干细胞的失活率， 不能保证研究实验数据的真实准确性。 发明内容 0004 （一） 解决的技术问题 针对现有技术的不。
10、足， 本发明提供了一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 解 决了目前在人体的脑干细胞研究中， 需要研究人体脑干细胞分化能力和传代能力， 实验中 跟踪人体脑干细胞分化和传代的能力差， 从延长了研究的时间， 在此过程中提高了人体脑 干细胞的失活率， 不能保证研究实验数据的线 （二） 技术方案 为实现以上目的， 本发明通过以下技术方案予以实现： 一种人体研究用脑干细胞的制 备和提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 步骤一、 对人体的脑干组织切片， 用生理盐水清洗切片的脑干组织， 用酒精棉将表面擦 拭干净； 步骤二、 切片的脑干组织放入 30% 的蔗糖溶液中 4保存，。
11、 脑干组织在蔗糖溶液中脱 水； 步骤三、 对脱水的切片脑干粉碎处理， 使用浓度为0.1%的胶原酶 处理， 控制胶原酶 的 温度在人体生存的最适温度36-37， 酶解处理时间为68小时； 步骤四、 向酶解处理后的脑干细胞组织液加入五倍体积的人体的生理盐水， 经过筛网 初步过滤后， 放入差速离心机中进一步过滤， 得到高纯度脑干细胞组织液； 步骤五、 制备八组无血清基础培养基中， 将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础培养 基中充分溶解， 通过专用吸取装置1对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组， 并且分别加入 说明书 1/4 页 3 CN 108823163 A 3 到含有BrdU和DCX荧光物质。
12、的无血清基础培养基中， 培养环境接近于人体生存环境； 步骤六、 分别提取八组无血清基础培养基中的脑干细胞组织， 在显微镜下观察各组 BrdU和DCX荧光物质在脑干细胞组织中的位置， 根据观察结果研究脑干细胞的分化和传代； 步骤七、 对标记后的脑干细胞组织进行冷冻封存处理。 0006 优选的， 所述步骤七中冷冻封存处理， 按照一定的时间和降速度进行冷冻， 然后转 移到液氮罐中封存。 0007 优选的， 所述步骤五中脑干细胞在无血清基础培养基内的培养时间为78天。 0008 优选的， 所述专用吸取装置包括移液收集槽， 所述移液收集槽顶端固定连接有固 定顶框， 所述移液收集槽外壁的表面设置有刻度， 。
13、所述移液收集槽的底端固定连接有连接 口， 所述连接口远离移液收集槽的底端连通有乳胶管， 所述乳胶管远离连接口的一端连通 有采集针头。 0009 优选的， 所述固定顶框顶端的中间位置固定连接有贯穿插槽， 所述贯穿插槽的内 部惯出且滑动连接有传动连杆。 0010 优选的， 所述传动连杆位于固定顶框外部的顶端固连接有按压触头。 0011 优选的， 所述传动连杆位于固定顶框内部的两侧均固定连接有弹簧挡板。 0012 优选的， 所述弹簧挡板的顶端通过拉伸弹簧与固定顶框内部顶端固定连接。 0013 优选的， 所述传动连杆底端延伸至专用吸取装置内部的一端固定连接有橡胶移液 塞。 0014 优选的， 所述刻度。
14、的量程设置为20-200mL。 0015 （三） 有益效果 本发明提供了一种人体研究用脑干细胞的制备和提取方法。 具备以下有益效果： （1） 、 该人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 通过切片的脑干组织放入 30% 的蔗 糖溶液中 4保存， 脑干组织在蔗糖溶液中脱水， 对脱水的切片脑干粉碎处理， 使用浓度为 0.1%的胶原酶 处理， 控制胶原酶 的温度在人体生存的最适温度37， 酶解处理时间为8小 时， 向酶解处理后的脑干细胞组织液加入五倍体积的人体的生理盐水， 经过筛网初步过滤 后， 放入差速离心机中进一步过滤， 得到高纯度脑干细胞组织液， 制备八组无血清基础培养 基中， 将BrdU和DC。
15、X荧光物质加入到无血清基础培养基中充分溶解， 通过专用吸取装置1对 高纯度脑干细胞组织液等量分成八组， 并且分别加入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清 基础培养基中， 培养环境接近于人体生存环境， 达到了实现多组用免疫荧光物质染色， 便于 研究追踪脑干细胞的分化和传代率， 保证实验数据线） 、 该人体研究用脑干细胞的制备和提取方法， 通过手动向下按压按压触头,按 压触头带动传动连杆向下移动， 传动连杆带动拉伸弹簧在移液收集槽内向下移动， 将采集 针头放入培养液中， 手缓缓松开按压触头,拉伸弹簧通过弹簧挡板带动橡胶移液塞向上移 动， 根据刻度吸取适量的培养液。
16、， 达到了实现吸取培养液的同时定量量取培养液， 提高吸取 效率， 同时缩短吸取过程消耗的时间， 保证脑干细胞活性的目的。 附图说明 0017 图1为本发明专用吸取装置的结构示意图； 图2为本发明固定顶框的内部结构示意图； 说明书 2/4 页 4 CN 108823163 A 4 图中： 1专用吸取装置、 2移液收集槽、 3固定顶框、 4刻度、 5连接口、 6乳胶管、 7采集针头、 8贯穿插槽、 9传动连杆、 10按压触头、 11弹簧挡板、 12拉伸弹簧、 13橡胶移液塞。 具体实施方式 0018 下面将结合本发明实施例中的附图， 对本发明实施例中的技术方案进行清楚、 完 整地描述， 显然， 所。
17、描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。 基于 本发明中的实施例， 本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例， 都属于本发明保护的范围。 0019 请参阅图1-2， 本发明提供一种技术方案： 一种人体研究用脑干细胞的制备和提取 方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 步骤一、 对人体的脑干组织切片， 用生理盐水清洗切片的脑干组织， 用酒精棉将表面擦 拭干净； 步骤二、 切片的脑干组织放入 30% 的蔗糖溶液中 4保存， 脑干组织在蔗糖溶液中脱 水； 步骤三、 对脱水的切片脑干粉碎处理， 使用浓度为0.1%的胶原酶 处理， 控制胶原酶 的 温度在人体。
18、生存的最适温度36-37， 酶解处理时间为68小时； 步骤四、 向酶解处理后的脑干细胞组织液加入五倍体积的人体的生理盐水， 经过筛网 初步过滤后， 放入差速离心机中进一步过滤， 得到高纯度脑干细胞组织液； 步骤五、 制备八组无血清基础培养基中， 将BrdU和DCX荧光物质加入到无血清基础培养 基中充分溶解， 通过专用吸取装置 （1） 对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组， 并且分别加 入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清基础培养基中， 培养环境接近于人体生存环境； 步骤六、 分别提取八组无血清基础培养基中的脑干细胞组织， 在显微镜下观察各组 BrdU和DCX荧光物质在脑干细胞组织中的位置， 。
19、根据观察结果研究脑干细胞的分化和传代； 步骤七、 对标记后的脑干细胞组织进行冷冻封存处理。 0020 步骤七中冷冻封存处理， 按照一定的时间和降速度进行冷冻， 然后转移到液氮罐 中封存。 步骤五中脑干细胞在无血清基础培养基内的培养时间为78天。 专用吸取装置1包 括移液收集槽2， 移液收集槽2顶端固定连接有固定顶框3， 移液收集槽2外壁的表面设置有 刻度4， 移液收集槽2的底端固定连接有连接口5， 连接口5远离移液收集槽2的底端连通有乳 胶管6， 乳胶管6远离连接口5的一端连通有采集针头7。 固定顶框3顶端的中间位置固定连接 有贯穿插槽8， 贯穿插槽8的内部惯出且滑动连接有传动连杆9。 传动连。
20、杆9位于固定顶框3外 部的顶端固连接有按压触头10。 传动连杆9位于固定顶框3内部的两侧均固定连接有弹簧挡 板11。 弹簧挡板11的顶端通过拉伸弹簧12与固定顶框3内部顶端固定连接。 传动连杆9底端 延伸至专用吸取装置1内部的一端固定连接有橡胶移液塞13。 刻度4的量程设置为20- 200mL。 0021 使用时， 通过切片的脑干组织放入 30% 的蔗糖溶液中 4保存， 脑干组织在蔗糖 溶液中脱水， 对脱水的切片脑干粉碎处理， 使用浓度为0.1%的胶原酶 处理， 控制胶原酶 的 温度在人体生存的最适温度37， 酶解处理时间为8小时， 向酶解处理后的脑干细胞组织液 加入五倍体积的人体的生理盐水，。
21、 经过筛网初步过滤后， 放入差速离心机中进一步过滤， 得 到高纯度脑干细胞组织液， 制备八组无血清基础培养基中， 将BrdU和DCX荧光物质加入到无 说明书 3/4 页 5 CN 108823163 A 5 血清基础培养基中充分溶解， 通过专用吸取装置1对高纯度脑干细胞组织液等量分成八组， 并且分别加入到含有BrdU和DCX荧光物质的无血清基础培养基中， 培养环境接近于人体生 存环境， 达到了实现多组用免疫荧光物质染色， 便于研究追踪脑干细胞的分化和传代率， 保 证实验数据真实和准确性的目的。 通过手动向下按压按压触头,按压触头带动传动连杆向 下移动， 传动连杆带动拉伸弹簧在移液收集槽内向下移。
22、动， 将采集针头放入培养液中， 手缓 缓松开按压触头,拉伸弹簧通过弹簧挡板带动橡胶移液塞向上移动， 根据刻度吸取适量的 培养液， 达到了实现吸取培养液的同时定量量取培养液， 提高吸取效率， 同时缩短吸取过程 消耗的时间， 保证脑干细胞活性的目的。 0022 需要说明的是， 在本文中， 诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实 体或者操作与另一个实体或操作区分开来， 而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存 在任何这种实际的关系或者顺序。 而且， 术语 “包括” 、“包含” 或者其任何其他变体意在涵盖 非排他性的包含， 从而使得包括一系列要素的过程、 方法、 物品或者设备不仅包括那些要 素。
23、， 而且还包括没有明确列出的其他要素， 或者是还包括为这种过程、 方法、 物品或者设备 所固有的要素。 在没有更多限制的情况下。 由语句 “包括一个.限定的要素， 并不排除 在包括所述要素的过程、 方法、 物品或者设备中还存在另外的相同要素” 。 0023 尽管已经示出和描述了本发明的实施例， 对于本领域的普通技术人员而言， 可以 理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、 修改、 替换 和变型， 本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。 说明书 4/4 页 6 CN 108823163 A 6 图1 说明书附图 1/2 页 7 CN 108823163 A 7 图2 说明书附图 2/2 页 8 CN 108823163 A 8 。
